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      北京鑒聯(lián)基因科技有限公司
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      小鼠細胞STR鑒定的檢測問題及誤區(qū)

        案例分析     |      2023-02-28 13:59:02

             細胞STR鑒定國際標準推出以來,至今已有12年。人源細胞STR鑒定的公開可參比數(shù)據(jù)已增至8000+,然而小鼠細胞STR可參比數(shù)據(jù)則很少,目前為84個(截止2023.1).

            STR鑒定關注的細胞質量控點主要有2個:一個是細胞系的身份識別,另一個是細胞系的種類交叉污染。

            對于人源細胞系目前有大量的參考STR數(shù)據(jù)可比對,所以鑒定檢測的頻率更高。

            對于小鼠細胞系,因公布的參考STR數(shù)據(jù)較少,所以鑒定檢測的頻率則較低。但是正因此,才需要對更多的小鼠細胞進行STR檢測,通過與現(xiàn)有的小鼠STR數(shù)據(jù)比對,排除被已知STR數(shù)據(jù)的小鼠細胞污染或錯誤識別。進行小鼠細胞STR檢測既能滿足發(fā)表文章雜志編輯對STR數(shù)據(jù)提交的要求,同時得到了相關小鼠細胞的STR數(shù)據(jù),便于接受更多的第三方進行評估。

           然而在這個過程中,總會有些不規(guī)范和不合理的現(xiàn)象及結果會誤導大家對小鼠細胞STR鑒定的認識。

            在我們進行小鼠細胞STR檢測的過程中,對所遇到的不規(guī)范不合理現(xiàn)象總結出來,供行業(yè)參考以避免不合理的結果解釋和認識誤區(qū)。

             一、目前小鼠細胞STR鑒定的標準位點為18個而非9個。

            2019年,ATCC、NIST等單位聯(lián)合發(fā)表了一篇文章:《Interlaboratory study to validate a STR profiling method for intraspecies identification of mouse cell lines》,其中明確了小鼠細胞STR鑒定聯(lián)合采用1-1、1-2、2-1、3-2、4-2、5-5、6-4、6-7、7-1、8-1、11-2、12-1、13-1、15-3、17-2、18-3、19-2、X-1等18個STR位點。并公布了相關小鼠細胞的18個STR位點數(shù)據(jù)。目前cellosaurus數(shù)據(jù)庫提供的小鼠細胞STR參考數(shù)據(jù)都是基于18個小鼠STR位點的。由此可見小鼠細胞STR鑒定的標準位點是18個,對于采用9個小鼠STR位點進行的檢測,其匹配準確度自然大打折扣。

      小鼠STR-18位點-30K.gif

            二、對于沒有公布STR參考數(shù)據(jù)的小鼠細胞,檢測結果卻是100%匹配結果的討論

            一般進行細胞STR數(shù)據(jù)比對時,都是以國際公布的STR數(shù)據(jù)庫進行盲比,根據(jù)匹配度高低反應該細胞的真實身份。尤其對于小鼠細胞,因公布的參比數(shù)據(jù)有限,可能很多小鼠細胞STR數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫比對后沒有80%(參考人源細胞的認定標準)以上的結果。而對于數(shù)據(jù)庫都沒有提供STR數(shù)據(jù)庫的細胞,匹配度也達到100%的情況,可能的解釋只有企業(yè)自身有某個細胞,先行檢測了該細胞STR數(shù)據(jù)后并作為標準依據(jù),而不是與國際標準細胞庫的數(shù)據(jù)進行比對的匹配結果。但需要注意的是,該標準數(shù)據(jù)應首先與目前國際公布的數(shù)據(jù)進行盲比以排除該細胞沒有被已知細胞污染。在此前提下,該數(shù)據(jù)暫可作為企業(yè)內部質控的評估依據(jù)。但以此作為認定依據(jù)時,需謹慎。附圖說明:1、MLE-12細胞,國際的標準STR數(shù)據(jù)庫未見該細胞的STR數(shù)據(jù)。2、檢測結果提示檢測細胞與MLE-12細胞的匹配度為100%,但備注的說法又與細胞庫描述的MLE-12細胞的背景信息不符。

      小鼠MLE-12細胞.jpg

            三、對于小鼠細胞STR分型結果的解釋

            STR分型結果反映的是該基因位點的核心重復序列的重復次數(shù),所以結果是形如“12,13”的形式。在實際檢測過程中,因為有等位基因標準品ladder,可直接得到”12,13”等分型結果。確保同一樣本不同時間,不同人員,不同儀器的可檢出重復結果。如果沒有等位基因標準品ladder,檢測分析時首先得到的是該STR基因位點的片段長度值(如:233.89),通過片段長度值及該位點的重復堿基數(shù)推算出“12,13”的分型結果。但此種缺乏標準品ladder的分析,因每次電泳的長度值存在偏離,存在分型錯誤的風險。如圖所示:

      小鼠細胞STR分型檢測片段長度.jpg

      圖片7-44k.jpg



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